Приготовление и хранение препаратов — техника приготовления музейных препаратов

Микроскоп Микромед С-11 вар. 1B LED

Приготовление и хранение препаратов - техника приготовления музейных препаратов

Микроскопы открывают крохотные миры.
С помощью микроскопа можно увидеть невероятный мир, существующий на клеточном уровне.

Поразительным свойством микропрепаратов является возможность их длительного хранения и наблюдения распада клеток с течением времени.

В любом случае, если не терпится поскорее взглянуть на образец или проводится долгое научное исследование, нужно научиться приготавливать микропрепараты.

Приготовление сухого препарата

Сухие препараты используются для изучения образцов, не требующих для выживания контакта с водой. Для начала потребуется чистое предметное стекло. Осторожно поместите как можно более тонкий срез образца в центр предметного стекла и накройте его покровным стеклом. Если вы в резиновых перчатках, можете слегка придавить покровное стекло, чтобы выровнять препарат.

Приготовление влажного препарата

Влажные препараты используются, если образец не может обходиться без воды, чтобы оставаться живым. Это часто бывает с одноклеточными организмами и мелкими животными. Возьмите чистое предметное стекло.

С помощью пипетки, поместите одну-две капли дистиллированной воды в центр стекла. Поместите в воду образец и накройте его покровным стеклом. Опять же, можно немного прижать покровное стекло, если на руках резиновые перчатки.

Прикосновение к стеклу без перчаток оставит на нем отпечатки, мешающие наблюдениям препарата под микроскопом.

Влажные препараты сами по себе удерживают покровное стекло на месте и могут храниться некоторое время. Если исследуемые микроорганизмы слишком подвижны, чтобы их можно было изучать, «замедлить» их, добавив в воду связующий компонент, например «Protoslo» (1,5% раствор метилцеллюлозы).

Подкрашивание препаратов

Некоторые организмы трудно увидеть под микроскопом без дополнительного окрашивания. Лучший способ это сделать – добавить капельку раствора Люголя (раствор йода и йодида калия) в воду перед тем, как поместить в нее образец. Также можно использовать растворы «метиленового синего» или «кристаллического фиолетового».

Если требуется окрасить уже готовый препарат, можно попробовать такую хитрость. Поместите с одной стороны покровного стекла краситель, а с другой – бумажную салфетку. Салфетка будет вытягивать влагу из-под стекла с  одной стороны и таким образом затягивать под него краситель с другой стороны.

Рекомендуемые товары

Другие обзоры и статьи о микроскопах, микропрепаратах и микромире:

  • ! Микроскоп Levenhuk 870T: видеосравнение фильтрованной и нефильтрованной воды (канал MAD SCIENCE, .com)
  • ! Микроскоп Levenhuk 870T: жизнь в капле воды с болота (канал MAD SCIENCE, .com)
  • ! Микроскоп Levenhuk 870T: видео радиоактивной воды (канал MAD SCIENCE, .com)
  • ! Микроскоп Levenhuk 870T: видеообзор (канал MAD SCIENCE, .com)
  • ! Микроскоп Levenhuk 870T: видео соленой воды (канал MAD SCIENCE, .com)
  • Медицинские микроскопы Levenhuk MED: обзорная статья на сайте levenhuk.ru
  • ! Портативный микроскоп Bresser National Geographic 20–40x и другие детские приборы линейки: видеообзор (канал «Татьяна Михеева», .com)
  • Книги знаний издательства Levenhuk Press: подробный обзор на сайте levenhuk.ru
  • ! Книга знаний в 2 томах. «Космос. Микромир»: видеопрезентация (канал LevenhukOnline, .ru)
  • ! бактерий под микроскопом Levenhuk Rainbow 2L PLUS (канал «Микромир под микроскопом», .ru)
  • Обзор микроскопа Levenhuk Rainbow 50L PLUS на сайте levenhuk.ru
  • ! Подробный обзор серии детских микроскопов Levenhuk LabZZ M101 (канал Kent Channel TV, .ru)
  • Обзор набора оптической техники Levenhuk LabZZ MTВ3 (микроскоп, телескоп и бинокль) на сайте levenhuk.ru
  • ! Микроскоп Levenhuk DTX 90: распаковка и видеообзор цифрового микроскопа (канал Kent Channel TV, .ru)
  • ! презентация увлекательной и красочной книги для детей «Невидимый мир» (канал LevenhukOnline, .ru)
  • ! Большой обзор биологического микроскопа Levenhuk 3S NG (канал Kent Channel TV, .ru)
  • Микроскопы Levenhuk Rainbow 2L PLUS
  • ! Микроскопы Levenhuk Rainbow и LabZZ (канал LevenhukOnline, .ru)
  • Микроскоп Levenhuk Rainbow 2L PLUS LimeЛайм. Изучаем микромир
  • Выбираем лучший детский микроскоп
  • ! Микроскопы Levenhuk Rainbow 2L: видеообзор серии микроскопов (канал LevenhukOnline, .ru)
  • ! Микроскопы Levenhuk Rainbow 2L PLUS: видеообзор серии микроскопов (канал LevenhukOnline, .ru)
  • ! Микроскопы Levenhuk Rainbow 50L: видеообзор серии микроскопов (канал LevenhukOnline, .ru)
  • ! Микроскопы Levenhuk Rainbow 50L PLUS: видеообзор серии микроскопов (канал LevenhukOnline, .ru)
  • ! Микроскоп Levenhuk Rainbow D2L: видеообзор цифрового микроскопа (канал LevenhukOnline, .ru)
  • ! Микроскоп Levenhuk Rainbow D50L PLUS: видеообзор цифрового микроскопа (канал LevenhukOnline, .ru)
  • Обзор биологического микроскопа Levenhuk Rainbow 50L
  • ! обзор школьных микроскопов Levenhuk Rainbow 2L и 2L PLUS: лучший подарок ребенку (канал KentChannelTV, .ru)
  • ! Как выбрать микроскоп: видеообзор для любителей микромира (канал LevenhukOnline, .ru)
  • Галерея фотографий! Наборы готовых микропрепаратов Levenhuk
  • Микроскопия: метод темного поля
  • ! «Один день инфузории-туфельки»: видео снято при помощи микроскопа Levenhuk 2L NG и цифровой камеры Levenhuk (канал LevenhukOnline, .ru)
  • ! Обзор микроскопа Levenhuk Rainbow 2L NG Azure на телеканале «Карусель» (канал LevenhukOnline, .ru)
  • Обзор микроскопа Levenhuk Фиксики Файер
  • Совместимость микроскопов Levenhuk с цифровыми камерами Levenhuk
  • Как работает микроскоп
  • Как настроить микроскоп
  • Как ухаживать за микроскопом
  • Типы микроскопов
  • Техника приготовления микропрепаратов
  • Галерея фотографий! Что можно увидеть в микроскопы Levenhuk Rainbow 50L, 50L PLUS, D50L PLUS
  • Сетка или шкала. Микроскоп и возможность проведения точных измерений
  • Обычные предметы под объективом микроскопа
  • Насекомые под микроскопом: фото с названиями
  • Инфузории под микроскопом
  • Изобретение микроскопа
  • Как выбрать микроскоп
  • Как выглядят лейкоциты под микроскопом
  • Что такое лазерный сканирующий микроскоп?
  • Микроскоп люминесцентный: цена высока, но оправданна
  • Микроскоп для пайки микросхем
  • Иммерсионная система микроскопа
  • Измерительный микроскоп
  • Микроскопы от самых больших профессиональных моделей до простых детских
  • Микроскоп профессиональный цифровой
  • Силовой микроскоп: для серьезных исследований и развлечений
  • Лечение зубов под микроскопом
  • Кровь человека под микроскопом
  • Галогенные лампы для микроскопов
  • Французские опыты – микроскопы и развивающие наборы от Bondibon
  • Наборы препаратов для микроскопа
  • Юстировка микроскопа
  • Микроскоп для ремонта электроники
  • Операционный микроскоп: цена, возможности, сферы применения
  • «Шкаловой микроскоп» – какой оптический прибор так называют?
  • Бородавка под микроскопом
  • Вирусы под микроскопом
  • Принцип работы темнопольного микроскопа
  • Покровные стекла для микроскопа – купить или нет?
  • Увеличение оптического микроскопа
  • Оптическая схема микроскопа
  • Схема просвечивающего электронного микроскопа
  • Устройство оптического микроскопа у теодолита
  • Грибок под микроскопом: фото и особенности исследования
  • Зачем нужна цифровая камера для микроскопа?
  • Предметный столик микроскопа – что это и зачем он нужен?
  • Микроскопы проходящего света
  • Органоиды, обнаруженные с помощью электронного микроскопа
  • Паук под микроскопом: фото и особенности изучения
  • Из чего состоит микроскоп?
  • Как выглядят волосы под микроскопом?
  • Глаз под микроскопом: фото насекомых
  • Микроскоп из веб-камеры своими руками
  • Микроскопы светлого поля
  • Механическая система микроскопа
  • Объектив и окуляр микроскопа
  • USB-микроскоп для компьютера
  • Универсальный микроскоп – существует ли такой?
  • Песок под микроскопом
  • Муравей через микроскоп: изучаем и фотографируем
  • Растительная клетка под световым микроскопом
  • Цифровой промышленный микроскоп
  • ДНК человека под микроскопом
  • Как сделать микроскоп в домашних условиях
  • Первые микроскопы
  • Микроскоп стерео: купить или нет?
  • Как выглядит раковая клетка под микроскопом?
  • Металлографический микроскоп: купить или не стоит?
  • Флуоресцентный микроскоп: цена и особенности
  • Что такое «ионный микроскоп»?
  • Грязь под микроскопом
  • Как выглядит клещ под микроскопом
  • Как выглядит червяк под микроскопом
  • Как выглядят дрожжи под микроскопом
  • Что можно увидеть в микроскоп?
  • Зачем нужны исследовательские микроскопы?
  • Бактерии под микроскопом: фото и особенности наблюдения
  • На что влияет апертура объектива микроскопа?
  • Аскариды под микроскопом: фото и особенности изучения
  • Как использовать микропрепараты для микроскопа
  • Изучаем ГОСТ: микроскопы, соответствующие стандартам
  • Микроскоп инструментальный – купить или нет?
  • Где купить отсчетный микроскоп и зачем он нужен?
  • Атом под электронным микроскопом
  • Как кусает комар под микроскопом
  • Как выглядит муха под микроскопом
  • Амеба: фото под микроскопом
  • Подкованная блоха под микроскопом
  • Вша под микроскопом
  • Плесень хлеба под микроскопом
  • Зубы под микроскопом: фото и особенности наблюдения
  • Снежинка под микроскопом
  • Бабочка под микроскопом: фото и особенности наблюдений
  • Самый мощный микроскоп – как выбрать правильно?
  • Рот пиявки под микроскопом
  • Мошка под микроскопом: челюсти и строение тела
  • Микробы на руках под микроскопом – как увидеть?
  • Вода под микроскопом
  • Как выглядит глист под микроскопом
  • Клетка под световым микроскопом
  • Клетка лука под микроскопом
  • Мозги под микроскопом
  • Кожа человека под микроскопом
  • Кристаллы под микроскопом
  • Основное преимущество световой микроскопии перед электронной
  • Конфокальная флуоресцентная микроскопия
  • Зондовый микроскоп
  • Принцип работы сканирующего зондового микроскопа
  • Почему трудно изготовить рентгеновский микроскоп?
  • Макровинт и микровинт микроскопа – что это такое?
  • Что такое тубус в микроскопе?
  • плоскость поляризатора
  • На что влияет угол между главными плоскостями поляризатора и анализатора?
  • Назначение поляризатора и анализатора
  • Метод изучения – микроскопия на практике
  • Микроскопия осадка мочи: расшифровка
  • Анализ «Микроскопия мазка»
  • Сканирующая электронная микроскопия
  • Методы световой микроскопии
  • Оптическая микроскопия (световая)
  • Световая, люминесцентная, электронная микроскопия – разные методы исследований
  • Темнопольная микроскопия
  • Фазово-контрастная микроскопия
  • Поляризаторы естественного света
  • Шотландский физик, придумавший поляризатор
  • Механизм фокусировки в микроскопе
  • Что такое полевая диафрагма?
  • Микроскоп Микромед: инструкция по эксплуатации
  • Микроскоп Микмед: инструкция по эксплуатации
  • Где найти инструкцию микроскопа «ЛОМО»?
  • Микроскопы Micros: руководство пользователя
  • Какую функцию выполняют зажимы на микроскопе
  • Рабочее расстояние объектива микроскопа
  • Микропрепарат для микроскопа своими руками
  • Метод висячей капли
  • Метод раздавленной капли
  • Тихоходка под микроскопом
  • Аппарат Гольджи под микроскопом
  • Чем занять детей дома?
  • Чем заняться на карантине дома?
  • Чем заняться школьникам на карантине?
  • Выбираем микроскоп: отзывы имеют значение?
  • Микроскоп для школьника: какой выбрать?
  • Немного об оптовой закупке микроскопов и иной оптической техники
  • Во сколько увеличивает лупа?
  • Где купить лампу-лупу – косметологическую модель с подсветкой?
  • Какую купить лампу-лупу для маникюра?
  • Можно ли купить лампу-лупу для наращивания ресниц в интернет-магазине?
  • Лампа-лупа косметологическая на штативе: купить домой или нет?
  • Лупа бинокулярная с принадлежностями
  • Как выглядит лупа для нумизмата?
  • Лупа-лампа – лупа для рукоделия с подсветкой
  • «Лупа на стойке» – что это за оптический прибор?
  • Лупа – проектор для увеличенного изображения
  • Делаем лупу своими руками
  • Основные функции лупы
  • Где найти лупу?
  • Лупа бинокулярная – цена возможностей
  • Лупа канцелярская: выбираем оптическую технику для офиса
  • Как выглядит коронавирус под микроскопом?
  • Как называется главная часть микроскопа?
  • Где купить блоки питания для микроскопа?
  • Строение объектива микроскопа
  • Как выглядят продукты под микроскопом
  • Что покажет музей микроминиатюр
  • Особенности и применение методов окрашивания клеток

Техника приготовления музейных препаратов — Приготовление и хранение препаратов

Приготовление и хранение препаратов - техника приготовления музейных препаратов

Подробности Категория: Архивы

Из всех способов заделки препаратов наилучшим и наиболее распространенным является влажный, когда препарат заключают в банку со свежей порцией глицериновой смеси. Для этой цели могут быть использованы любые стеклянные банки соответствующих размеров, но особенно хороши и удобны четырехугольные (специально музейные).

Помещаемый в банку объект укрепляют при помощи толстых шелковых ниток на стеклянной пластинке или рамке. Последние готовят на горелке из толстых стеклянных палочек. Очень хороши для монтирования препаратов пластинки в рамки из плексигласа.

Препараты, легко всплывающие на поверхность жидкости, закрепляют на таких пластинках и рамках, которые одним своим ребром упираются в дно, а другим — в крышку банки. Для тех же целей можно воспользоваться и толстыми (тяжелыми) стеклянными пластинками. При полном соответствии препарата и банки никакого специального закрепления не требуется.

Если необходимо укрепить на препарате какие-либо камни (желчные или мочевые), то их приклеивают 20—25%-ным раствором желатины, которую затем подвергают дублению 15—20%-ным раствором формалина. Формалинизацию проводят осторожно, не повреждая окраски препарата, пользуясь для этого ватой, смоченной в формалине и аккуратно наложенной на желатину в области приклеиваемых камней.

После того, как препарат соответствующим образом установлен и укреплен, банку закрывают стеклянной крышкой, приклеивая ее. Надо заметить, что часто применяемая для этой цели менделеевская замазка  мало пригодна, так как крышка, закрепленная ею, легко отваливается. Более практична замазка Г. В.

Шора следующего состава: Гуттаперча                                                     100 г Черная смола                                               400 » Асфальт                                                           200 » Сало несоленое                                            200 » Канифоль                                                       400 » Замазку готовят в металлической посуде при нагревании и тщательном размешивании. Эта замазка хорошо противостоит размывающему действию глицериновых смесей, но к ней нужно приспособиться. В зависимости от температурных условий, при которых сохраняются музейные препараты, приходится изменять количественные соотношения входящих в нее компонентов. Замазка должна быть в достаточной мере пластичной, но в то же время твердой и не давать потеков при длительном хранении препаратов. Слишком большое содержание канифоли делает замазку хрупкой и ведет к легкому отскакиванию ее, а следовательно и крышки, при сильном ударе. Для лучшего приставания замазки края банки предварительно хорошо очищают, протирая спиртом и бензином; затем при помощи горячего шпателя наносят ее на края банки в виде непрерывного валика и сверху кладут подогретую стеклянную крышку (пластинку). На крышку до полного застывания замазки помещают какую-нибудь тяжесть. После того, как крышка хорошо приклеится, производят окончательную отделку снаружи, замазывая все щели и оплавляя горячим шпателем выступающую замазку. Края банки покрывают асфальтовым лаком или черной эмалевой краской; можно оклеивать и полосками черной бумаги. В качестве заменителя глицериновой смеси для окончательной заделки препаратов предлагается солевой раствор Тизенгаузена следующего состава: Калийная селитра                            10 г Поваренная соль                            200 » Вода                   1000мл Эта жидкость легко плесневеет, поэтому ее готовят по мере надобности, кипятят, если надо, фильтруют и обязательно добавляют немного тимола или камфары.

Можно заключать препараты (после пропитывания в глицериновой смеси) и в насыщенный водный раствор сахара. Последний готовят из расчета 220 г сахара на 100 мл горячей воды.* Для более полного растворения банку с сиропом (плотно закрытую) ставят на 1—2 дня в термостат при температуре около 50— 55°. Кипятить сироп нельзя! Для предупреждения плесени в сироп добавляют немного тимола.

*Растворимость сахара при температуре 100° составляет 487, 2 г на 100 мл воды, а при 20° —203,9 г.

Наконец, при затруднениях с глицерином нужно учесть и такой метод заделки, когда препараты готовятся и монтируются как и для влажного способа, но глицериновая смесь наливается в банку в очень небольшом количестве, приблизительно на высоту нескольких сантиметров.

При такой заделке препарат время от времени обливается содержащейся в банке жидкостью посредством осторожного переворачивания банки. Такие полусухие препараты при хорошем уходе за ними сохраняются очень долго (годами) и в этом отношении выгодно отличаются от настоящих сухих препаратов, приготовленных по методу Г. В. Шора.

Музейные препараты, приготовленные с сохранением естественной окраски, должны храниться в темноте (во избежание выцветания) и в прохладном помещении. Препараты с угольной пигментацией хорошо сохраняются в любой жидкости и, в частности, в растворах формалина и в спирте. Желтушно окрашенные органы лучше всего хранить в сухом виде по Г.

В. Шору, ибо в глицериновых смесях и в растворах формалина желчные пигменты легко извлекаются, закрашивая жидкость. Препараты костей готовят различно: влажным способом, по способу Шора * и, наконец, сохраняют в сухом виде, вне всякой посуды. В последнем случае их последовательно подвергают мацерации, обезжириванию и отбеливанию.

Предварительно кости тщательно очищают от мягких тканей и промывают в водопроводной воде.

Мацерация достигается путем вымачивания костей в теплом содовом растворе до полного отделения мягких тканей.

По окончании мацерации следует обезжиривание, сначала в 96° спирте, а затем в эфире или бензине. Отбеливают или в перекиси водорода, или в хлорной извести, или, наконец, на солнце.

Подробности приготовления костей в сухом виде можно найти в работе Л. К. Ковешниковой и Е. А. Клебановой.

*В том случае, когда имеют в виду приготовление костей с сохранением окраски (т. е. влажным способом или по Шору), то нужные распилы делают только после фиксации костных объектов.

Хранение препаратов в сухом виде по Шору

Для хранения препаратов в сухом виде в качестве камер используют любую посуду: тарелки, миски (фаянсовые, эмалированные), цинковые тазы и т. д.* Перед заключением в такую посуду препараты выдерживают в глицериновой смеси (лучше всего в жидкости Шора) не менее 3—4 недель. Желательно, чтобы посуда по своим размерам соответствовала препаратам.

На дно камеры кладут толстый слой ваты, который в центральной части слегка смачивают глицериновой смесью и укладывают препарат. Очень важно, чтобы препарат плотно лежал в камере и не смещался, для этого вокруг него в виде рамки помещают массивный валик из свернутой марли или ваты.

Если таким путем не удается придать препарату должной устойчивости, то поступают следующим образом: берут подходящую по размерам стеклянную пластинку, обшивают ее марлей, прочно фиксируют на ней толстыми нитками (лучше шелковыми) препарат и затем эту пластинку (с препаратом) приклеивают к дну камеры шоровской или менделевской замазкой.

После того как препарат хорошо уложен, камеру закрывают. Крышку укрепляют менделеевской замазкой и края ее покрывают какой-нибудь черной краской (асфальтовым или битумным лаком, черной эмалью) или, наконец, оклеивают черной бумагой.

Перед закрытием камеры внутреннюю поверхность крышки, смазывают, во избежание отпотевания, тонким слоем глицериновой смеси. Технические подробности этого метода можно найти в оригинальных статьях Г. В. Шора.

  *При пользовании цинковыми тазами или деревянными ящиками последние тщательно и повторно прокрашивают как снаружи, так и изнутри белой эмалевой краской.             

Преимуществом метода Шора является исключительная простота приготовления и легкость препаратов; недостатком — необходимость постоянного контроля с целью своевременного извлечения подсыхающих препаратов и повторной обработки их в глицериновой смеси. Кроме того, этот метод уступает влажному и в смысле сохранения цвета.
Кубик (Kubik S., 1957) предложил оригинальный метод приготовления сухих препаратов, основанный на пропитывании тканей специальным лаком.

Некоторые замечания о других методах приготовлений музейных препаратов

Метод В. Т. Талалаева. Препараты заключают в желатину или агар-агар, между двумя стеклами, герметически замкнутыми по краям. Этот способ даст возможность готовить очень портативные и изящные препараты в виде пластинок.

Однако, несмотря на это, приготовление таких пластинчатых препаратов имеет незначительное распространение ввиду большой технической сложности, связанной с их монтажом. Кроме того, они уступают в прочности и длительности хранения препаратам, заключенным в жидкости. Исчерпывающие сведения технического порядка можно найти в целом ряде статей самого автора.

Есть и другие способы заделки препаратов, но они по разным причинам не получили широкого распространения, как, например, метод И. И. Медведева с применением гидрогеля кремниевой кислоты и весьма оригинальные способы заключения в прозрачные искусственные смолы и пластические массы (В. А. Наумов, 1948; М. Г.

Привес, 1955; Бернингер — Berninger, 1952; Гослар — Goslar, 1954; Эйхнер и Алерс — Eichner u. Ahlers, 1956; Кэмпмейер и Хевиленд—Kampmeier a. Haviland 1957; Петерс — Peters, 1956; Розенбауер — Rosenbauer, 1957; Новак —Nowak, 1958; и ми. др.).

Метод приготовления сухих желатинированных музейных препаратов

Для большей сохранности макропрепаратов при заделке их по сухому способу Шора в некоторых патологоанатомических отделениях с успехом применяют метод желатинирования. Методика такого желатинирования очень проста и состоит в следующем:

  1. Препараты, выдержанные достаточное время в жидкости Шора, перекладывают на 5—10 минут в свежую порцию той же жидкости, но подогретой до 50—60°.
  2. Вынимают препарат из глицериновой жидкости, дают стечь избытку ее и переносят в расплавленный (горячий) 25— 30%-ный раствор желатины* на 1 —2 минуты. Для удобства проведения этой процедуры препарат подвешивают на толстой суровой нитке и осторожно опускают в сосуд с расплавленной желатиной.**
  3. Извлеченный из раствора желатины препарат свободно подвешивают на нитке к какому-нибудь предмету, например к поперечно укрепленной палке, и в таком виде оставляют на воздухе, давая стечь излишней желатине и ожидая затвердения ее, на что требуется около 10—15 минут.
  4. Для дубления желатину помещают в 20°/о-ный раствор формалина на 5—15 минут.
  5. Промывают в воде несколько минут, затем ополаскивают в глицериновой жидкости и после этого либо сразу заделывают в какую-нибудь посуду (по способу Шора), либо до момента окончательной заделки сохраняют в глицериновой смеси. Слой формалинизированной желатины, покрывающий препарат, в этом последнем случае хорошо сохраняется.

*Применяют хорошую пищевую желатину и готовят ее на 1 — 2% карболовой воде. Техническая желатина непригодна.

**При каких-либо затруднениях, связанных с таким способом желатинирования (недостаток желатины, отсутствие посуды), можно покрыть препарат тонким слоем горячей желатины при помощи мягкой кисточки.

Для заделки желатинированных препаратов можно пользоваться как сухим методом Шора, так и полусухим.
Недостатком метода желатинирования является муляжный вид препаратов.

Лаборатория микроскопирования

Приготовление и хранение препаратов - техника приготовления музейных препаратов

Далеко не всё, что есть под рукой, имеет смысл класть на предметный столик и пытаться рассмотреть в окуляр микроскопа. Например, непрозрачные объекты (палец, монета) рассмотреть совсем не удастся, да и для рассматривания вполне достаточно сильной лупы.

Обычно для микроскопирования используют специально приготовленные микропрепараты. При приготовлении микропрепарата берется предметное стекло (размер 25 × 75 мм), на которое помещается рассматриваемый объект; обычно для лучшей сохранности и удобства использования объект накрывается сверху тонким покровным стеклом (размер 18 × 18 мм).

По способу приготовления и времени хранения различают:

  • постоянные препараты – объект помещен в прозрачную твердеющую среду (обычно канадский бальзам) и накрыт покровным стеклом; такие препараты могут храниться годами и десятилетиями, однако их приготовление весьма трудоемко (объект должен быть тщательно подготовлен: обезвожен, окрашен и др.);
  • временные препараты – объект помещен в жидкую среду (вода, физиологический раствор, глицерин-желатин и др.), такие препараты годны для использования в течение нескольких часов, однако с ними можно проводить опыты (например, заменять воду солевым раствором определенной концентрации, добавлять краситель и др.).
Постоянный препарат

В таблице представлены типы препаратов в зависимости от характера исследуемого объекта.

ТипОписаниеПостоянный/ временныйПример
1Тотальный препаратЦелый организм или его небольшие части (конечности, ротовой аппарат). Обычно требуют обработки (осветления)Постоянный, временный
2СрезОбъект заливается в пластичный материал (парафин, акрил) и после его затвердевания разрезается на тонкие пластины с помощью микротома (приспособления для получения тонких срезов)Обычно постоянный
3МазокТокослойный препарат без покровного стекла (обычно препарат крови): капля с помощью полированного стекла размазывается по поверхности предметного стекла тонким слоем, высушиваетсяВременный, реже постоянный
4ШлифТонкая (толщина 0,03-0,02 мм) пластинка горной породы или другого твердого образца (кости, окаменелости), приклеенная к покровному стеклуПостоянный

В некоторых случаях временный препарат можно рассматривать непосредственно, не накрывая покровным стеклом. Такой препарат будет практически невозможно рассмотреть резко сразу весь – какая-то часть его будет в фокусе, а остальное – нет. Но если рассматривать такой препарат с малым увеличением микроскопа, можно рассмотреть некоторые интересные объекты.

Микропрепарат клеток мякоти арбуза (без покровного стекла)

Так же в виде открытых временных препаратов можно вырастить кристаллы разных солей (ацетилсалициловой кислоты, или аспирина; медного купороса, или сульфата меди; красной кровяной соли, или гексацианоферрата калия).

На предварительно очищенное от пыли и отпечатков пальцев наносится несколько капель водного или спиртового раствора соли (для лучшего качества кристаллов раствор предварительно лучше профильтровать, так как это позволит уменьшить количество точек кристаллизации и получить более крупные и аккуратные кристаллы).

Каплям дают высохнуть (можно провести эксперимент с одним из стекол, нагрев его, с целью ускорения выпаривания, а другому дать растворителю испариться, а кристаллам – выпасть самостоятельно).

Также можно рассматривать полуготовый микропрепарат на этапе процесса кристаллизации: можно увидеть, как кристалл увеличивается прямо на глазах или как вокруг зародыша твердого вещества возникает течение жидкости из-за разницы концентраций ионов.

Простой и эффектный способ изготовления микропрепаратов без срезов, позволяющий рассмотреть рельеф поверхности изучаемого объекта (например, листа растения, покровов тела насекомого) – метод реплик.

При этом берется объект (например, лист растения), и на него наносится тонкий слой прозрачного лака для ногтей (достаточно небольшого пятна 5 × 10 мм).

После того, как лак высохнет (примерно через 5-7 минут), к лаковому пятну приклеивается кусок липкой ленты; так реплика отделяется, после чего ее кладут на предметное стекло и рассматривают под микроскопом. 

Реплика поверхности листа, видны устьичные клетки и жилка (микроскоп Микромед С-13, малое увеличение).

1.1. Приготовление временного препарата

Техника приготовления временного препарата хорошо известна по школьным опытам с кожицей лука. Кладем предметное стекло на стол (препараты всегда держат за боковые грани предметного стекла).

В центр стекла помещаем 1-2 капли воды и объект исследования Берем покровное стекло за боковые грани и осторожно накрываем им сверху каплю с объектом.

Правильнее упереть покровное  стекло одной из граней в предметное и медленно уменьшать угол между стеклами так, чтобы накрыть каплю с объектом. Это уменьшает возможность появления пузырьков воздуха.

Накрывание объекта покровным стеклом

1.2. Приготовление мазка крови

Мазки крови для исследования крови готовят следующим образом.

ШагОписаниеФотография
1Поместите небольшую каплю крови на лежащее на горизонтальной поверхности предметное стекло, с помощью стеклянной капиллярной пипетки (или непосредственно из места укола пальца перенесите выступившую каплю крови на конец стерильного предметного стекла, стараясь не касаться стекла проколотым участком кожи).
2Чистое шлифованное стекло помещается коротким ребром под углом 45° к предметному стеклу у края капли. Ждем, пока кровь расплывется под ребром стекла.
3Как только кровь растеклась по ребру, быстрым движением от капли проводим по предметному стеклу. Не следует сильно нажимать на стекло, так как при этом могут разрушиться форменные элементы крови.
4После приготовления мазок быстро сушат на воздухе до исчезновения влажного блеска, подержав его над абажуром лампы или помахав им в воздухе. Хорошо сделанный мазок тонок, имеет желтоватый цвет и оканчивается «метелочкой». Густо-розовые и красноватые мазки непригодны, так как они слишком толстые и клеточные элементы различить будет сложно.

Изображения и описание с сайта microtome.info/documents/micropreparaty.html.

2. Некоторые особенности микроскопирования

Использование микроскопов на малом и большом увеличении достаточно хорошо известно по школьным опытам и не требует особо сложных навыков.

2.1. Имерсионный объектив

Если в ващем распоряжении имеется микроскоп с иммерсионным объективом (он маркируется 100× МИ и черным кольцом, и имеет подвижную часть объектива, обращаемую к микропрепарату), то у вас есть возможность рассмотреть объекты с большим увеличением (однако для этого имеет смысл использовать мазки).

Порядок работы с объективом масляной иммерсии следующий.

  1. Выведите из хода лучей сухой объектив (поверните барабан объективов так, чтобы ни один объектив не был обращен к препарату).
  2. На препарат нанесите одну каплю иммерсионного (кедрового) масла; желательно иммерсионным маслом также немного смазать линзу этого объектива.
  3. Повернув барабан объективов, введите иммерсионный объектив в ход лучей (до щелчка фиксации).
  4. Опустите объектив до соприкосновения с каплей иммерсионного масла, затем, наблюдая в микроскоп, с помощью винтов грубой и точной фокусировки, произведите настройку на резкость.

При работе с иммерсионным объективом потребуется максимальная освещенность. После окончания исследования иммерсионный объектив нужно протереть мягкой оптической тряпочкой или батистовой, слегка смоченной специальной жидкостью для чистки оптики. Важно: любые другие виды объективов протирать нельзя!

Применение вместо кедрового масла других масляных жидкостей не рекомендуется, т. к., если показатель преломления используемой иммерсии (например, вазелинового масла с показателем 1,48162) отличается от показателя преломления кедрового масла (показатель 1,515), возможно снижение контраста, нечеткость изображения, уменьшение разрешающей способности.

2.2. Фотографии в косом освещении и темном поле

Для объемных препаратов (тотальные препараты насекомых, водорослей и др.) интересно использовать освещение, отличное от обычного просвечивающего.

Для регулировки освещения в микроскопах используется конденсор – поворотное устройство с отверстиями разного диаметра и расположения.

Используя специальные варианты конденсора, можно изменить характер освещения препарата, подчеркнув объем рассматриваемого объекта.

В таблице сравнивается работа с освещением разных типов.

Тип освещенияСпособ созданияВид зрачка объектива с вынутым окуляромПример
1Обычное (просвечи-вающее)Свет проходит через поле зрения равномерно.
2КосоеСвет проходит через препарат под углом, так как конденсор закрывает часть отверстия. Этого эффекта можно добиться притеняя рукой или другой преградой  часть светового потока перед зеркалом микроскопа
3Темное полеСпециальный конденсор закрывает центральную часть поля зрения, так что свет проходит с краев. При определенной тренировке такого эффекта также можно добиться, частично притеняя часть светового потока перед зеркалом микроскопа

3. Съемка

Фотографирование настроенного на резкость микропрепарата с помощью камеры планшета особых трудностей не представляет, так как мы непосредственно контролируем то, что именно будем снимать.

Настройки камеры планшета также зависят от типа устройства, которое вы используете; так как камера планшета обычно имеет достаточно большую глубину резкости, даже при настройках камеры по умолчанию можно получить вполне качественное изображение.

Планшетный компьютер и микроскоп: съемка, фотография, кадр с выносками и обозначениями

4. Интернет-ресурсы

Лекция по микроскопированию для студентов:

  •  fep.tti.sfedu.ru/russian/ehamt/learn/nano-biology/lek_2.pdf

Простые опыты в домашних экспериментах:

  • edu.altami.ru/research-index/

Сайты с историческими микроскопами и микропрепаратами:

Книга Роберта Гука (Robert Hooke) о микроскопировании “Micrographia: Some Physiological Descriptions of Minute Bodies Made by Magnifying Glasses with Observations and Inquiries Thereupon”

  • www.gutenberg.org/files/15491/15491-h/15491-h.htm.

Описание методики изготовления микроскопа Гука из бумаги: Nektarios Tsagliotis Build your own microscope: following in Robert Hooke’s footsteps (Сделай свой микроскоп: по следам Роберта Гука) // Science in School, Issue 22, p.29-35.

  • www.scienceinschool.org/2012/issue22/microscope.

Техника изготовления гистологических препаратов

Приготовление и хранение препаратов - техника приготовления музейных препаратов

Изготовление гистологических препаратов включает: 1) фиксацию материала; 2) приготовление гистологических срезов; 3) окрашивание срезов.

Фиксация материала

Общие сведения. Сущность фиксации заключается в том, чтобы сохранить взятые кусочки органов и тканей от гниения и ферментативных процессов, изменяющих структуру тканей.

Фиксируемые ткани претерпевают ряд физико-химических изменений. Наиболее существенными из них являются: быстрое свертывание белков и отчасти липоидов и переход их в такое состояние, при котором ткани не изменяются от длительного хранения и во время последующих обработок.

Фиксацию тканей производят в жидкостях различного состава. Наиболее употребляемыми являются формалин, спирт, реже ацетон, сулема и др.

Фиксация формалином. Продажный формалин (40%-ный водный раствор формальдегида) применяется в 10%-ном, 15%-ном растворе (10,0—15,0 продажного формалина на 90,0—85,0 воды). Формалин в указанной концентрации сравнительно быстро (48— 72 ч) пропитывает ткань и хорошо фиксирует ее.

Нельзя фиксировать материал в растворе формалина более высокой концентрации или в неразведенном продажном формалине.

В этом случае поверхностные слои ткани быстро уплотняются, образуют корочку, которая препятствует проникновению фиксирующей жидкости вглубь, где процессы аутолиза могут продолжаться.

В связи с тем, что в формалине всегда содержится какое-то количество муравьиной кислоты, которая может оказать отрицательное воздействие на ткань и помешать некоторым методам дальнейшей обработки материала (серебрение и др.) его следует нейтрализовать мелом. На 100 г продажного формалина (40%-ный раствор формальдегида) прибавляют Юг мела.

Содержимое несколько раз взбалтывают, затем дают отстояться, пока мел осядет на дно посуды. Следует также иметь в виду, что при хранении формалина в холодном помещении формальдегид способен к .полимеризации и выпадению из крепких растворов в виде белых осадков.

В целях предупреждения этого рекомендуют хранить формалин в теплом помещении, в темной посуде.

Кусочки ткани, взятые для гистологического исследования, не должны быть толще 0,5—0,7 см. Чтобы кусочки ткани не прилегали плотно к стенкам банки, их кладут на вату или фильтровальную бумагу.

Объем фиксирующей жидкости должен превышать примерно в 10 раз объем взятого материала.

Фиксация водным раствором формалина нежелательна в тех случаях, когда исследование ткани имеет целью обнаружение веществ, растворимых в воде.

В случаях, когда требуется быстрое исследование, кусочки ткани фиксируют в формалине, нагретом до 85—90° С. Продолжительность фиксации кусочков толщиной 2—3 мм при такой температуре 10—15мин.

При длительном хранении материала; в формалине в фиксируемой ткани образуются темно-бурые осадки, которые загрязняют препараты.

Для удаления осадков рекомендуется опускать гистологические срезы в 2—3%-ный раствор перекиси водорода или в 1%-ный раствор едкого кали, затем их несколько раз промывать водой.

Фиксация спиртом. Этот метод целесообразен только в тех случаях, кргда необходимо зафиксировать в тканях вещества, растворимые в воде и водных растворах фиксаторов. Для фиксации применяют спирт 95 или 100°.

Спирт, извлекая воду из кусочков ткани, сам разбавляется и делается менее крепким. Поэтому рекомендуется менять спирт несколько раз. Кусочки ткани при фиксации спиртом должны быть толщиной 2—3 мм.

В зимнее время рекомендуется применять спирт-формалин (спирта 70°—90,0, формалина 10,0).

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ СРЕЗОВ

Общие сведения. Для изготовления гистологических срезов фиксированная ткань нуждается в дополнительном уплотнении. Для этого существует несколько методов: замораживание ткани, пропитывание ее целлоидином, парафином и т. п.

После фиксации и уплотнения ткани тем или иным способом приготовляют срезы. Для получения тонких

Срезов одинаковой толщины, годных для макроскопического исследования, пользуются особыми аппаратами микротомами. Их существует несколько типов. Наиболее употребительными являются замораживающие и санные микротомы (рис. 137). Принцип устройства их состоит в том, что после каждого среза столик, к которому прикреплена исследуемая ткань, поднимается на заданную высоту.

Таким образом, срезы получаются одинаковой толщины. Срез должен быть достаточно тонким и прозрачным, обычно изготовляют срезы толщиной от 4 до 15 м>км. Замораживание ткани.

При изготовлении гистологических препаратов ткань замораживают на замораживающем микротоме, применяя жидкую углекислоту, эфир, хлорэтилен, или с помощью электрического тока на столике из полупроводников.

Путем замораживания ткани удается довольно быстро изготовить гистологические препараты. Этот метод используется также при исследовании тканей на отложение в них жира и жиросодержащих веществ, поскольку жиры растворяются в спиртах, ксилоле и ацетоне.

Заливка ткани в целлоидин. Для заливки препаратов в целлоидин вырезают кусочки ткани толщиной 1—3 мм и последовательно проводят через спирты возрастающей крепости — 50, 75, 95 и 100°, выдерживая по 24 ч в каждом.

Через спирт крепостью 100° кусочки ткани рекомендуется проводить дважды, выдерживая по 24 ч каждый раз. Затем кусочки ткани переносят в смесь равных частей абсолютного (100°) спирта и эфира также на 24 ч.

После этого кусочки ткани помещают вначале в 2%-ный, а потом 8%-ный раствор целлоидина на 2—3 дня в каждый.

Целлоидин готовят из кино — или фотопленки. Вначале ее отмывают от желатины в горячей воде, затем просушивают, мелко нарезают и растворяют в смеси из равных частей спирта и эфира. 2%-ный раствор целлоидина по консистенции сходен с жидким коллодием, а 8%-ный напоминает густой сироп.

После выдержки в густом целлоидине кусочки ткани заливают этим же целлоидином в чашечке под колпаком, где он уплотняется в течение 12—24 ч. Когда целлоидин приобретет плотность эластичной резины, вырезают блоки и наклеивают их целлоидином на квадратные деревянные кубики. Можно заливать кусочки ткани целлоидином непосредственно на кубиках.

Влоки необходимо маркировать, для чего на одной из боковых поверхностей кубика делают тушью соответствующее обозначение. Обычно пишут номер исследования.

Хранят кусочки, залитые в целлоидин, в 70° спирте. Заливка ткани в парафин. Обезвоживание ткани производят в спиртах восходящей крепости в том же порядке, как и при; целлоидиновой проводке.

После выдержки кусочков исследуемой ткани в 100° спирте их переносят в смесь равных частей абсолютного спирта и ксилола на 2—3 ч. Затем кусочки ткани заливают чистым ксилолом и выдерживают в течение 2 — 3 ч.

По истечении указанного срока их переносят в новый чистый ксилол на 2—3 ч, потом в парафин-ксилол (насыщенный раствор парафина в ксилоле при 30° С) на 1 —1,5 ч. После этого кусочки ткани помещают в чистый; парафин при температуре 54— 56° С на 1,5—2 ч.

Затем их заливают парафином в бумажные или металлические формочки и охлаждают в воде. Уплотненные кусочки ткани, так же как и целлоидиновые блоки, наклеивают на деревянные кубики и маркируют.

ОКРАШИВАНИЕ СРЕЗОВ

Общие сведения. Окраска гистологических срезов основана на неодинаковом сродстве тканевых элементов к определенным красителям. Ядра клеток более способны окрашиваться основными, а цитоплазма — кислыми красками. Соответственно этому различают основные, или ядерные, и кислые, или диффузные, краски.

Наиболее часто в обычной ветеринарной патологоанатомической практике применяются окраски срезов гематоксилин-эозином по Ван-Гизону, Перлсу, Суданом III и др.

Окраска гематоксилин-эозином. Окрашивают срезы в маленьких чашках Петри или на стеклах. Этот метод применяется для окраски срезов, приготовленных любым способом.

При этом ядра клеток приобретают фиолетово-синий или густо-синий цвет, а цитоплазма и волокнистое вещество — светло-синий или розово-красный. Жиры и липоиды не окрашиваются.

Эритроциты млекопитающих, поскольку они ядер не содержат, окрашиваются только эозином.

Окраску срезов в чашках Петри производят следующим образом.

1. Срез переносят препаровальной иглой из воды в раствор гематоксилина на 2—5 мин.

2. Промывают в воде 2—5 мин.

3. Погружают на 10—20 с в 1%-ный раствор соляной кислоты на 70° спирте (если срез сильно перекрашен гематоксилином, его следует держать в этом растворе несколько дольше).

4. Промывают в чистой воде 5—10 мин.

5. Промывают в слабощелочном растворе (в баночку с водой прибавляют 1—2 капли нашатырного спирта) 10 мин.

6. Промывают снова чистой водой в течение 10— 15 мин. Если срез после щелочной воды недостаточно промыт, он плохо опрашивается эозином.

7. Окрашивают эозином в течение 3—5 мин.

8. Промывают в течение 1—2 мин водой. 280

9. Обезвоживают в спиртах восходящей крепости— 75, 90, 100°. Если срез перекрашен эозином, его следует несколько дольше держать в 75° спирте.

10. Просветляют в карболксилоле.

11. При помощи шпателя и иголки срез переносят на предметное стекло.

12. Высушивают фильтровальной бумагой.

13. На срез наносят каплю канадского или пихтового бальзама и накрывают покровным стеклом.

Окраска по Ван-Гизону. В срезах, окрашенных по Ван-Гизону, соединительная ткань красится в ярко-красный, остальные ткани — в желтый или серовато-желтый цвет. Ядра окрашиваются в черный или тёмно-фиолетовый цвет.

Окраску производят следующим образом.

1. Срезы интенсивно окрашивают гематоксилином (лучше гематоксилин Вейгерта) и споласкивают в воде.

2. Сразу переносят в пикрофуксин на 3—5 мин (смесь насыщенного водного раствора пикриновой кислоты—150,0 и насыщенного водного раствора кислого фуксина — 3,0—5,0).

3. Быстро промывают в воде (вода извлекает из среза фуксин).

4. Обезвоживают 95° спиртом 1—2 мин.

5. Просветляют в карболксилоле и заключают в пихтовый бальзам, как при окраске гематоксилин-эозином.

Окраска Суданом III. Судан III — нейтральная азокраска, растворимая в спирте, ацетоне и жирах, не растворимая в воде. Окраску Суданом III производят для определения в срезах жиров и липидов. Техника окраски следующая.

1. Замороженные срезы переносят изводы на 0,5— 1 мин в 50° спирт.

2. Срезы помещают в свежефильтрованный раствор Судана на 10—20 мин.

3. Споласкивают 50° спиртом в течение 0,5—1 мин.

4. Тщательно промывают водой в течение 10 — 15 мин.

5. Срезы подкрашивают квасцовым гематоксилином Эрлиха или Бемера.

6. Промывают водой в течение 3—5 мин. Перекрашенные в гематоксилине срезы дифференцируют

В 1%-ном водном растворе соляной кислоты, споласкивают подщелоченной водой, затем чистой водой.

7. Заключают в глицерин или глицерин-желатину.

8. Накрывают покровным стеклом. Окраска по Перлсу. Этот способ окраски применяют для выявления в тканях гемосидерина.

1. Из дистиллированной воды срезы переносят стеклянными иглами на 15—20 мин в свежеприготовленную смесь, состоящую из одной части 2%-ного раствора желтой кровяной соли и полутора частей 1%-ного водного раствора соляной кислоты.

2. Промывают дистиллированной водой в течение 5—10 мин.

3. Докрашивают квасцовым кармином 15—20 мин.

4. Ополаскивают в воде и проводят через спирты, карболксилол и бальзам.

Железосодержащий пигмент — гемосидерин — приобретает синевато-зеленоватый или голубоватый цвет.

Окраска по Туревичу. По способу Туревича окрашивают срезы, изготовленные из мозга, для диагностики бешенства. При этом тельца Бабеша — Негри и эритроциты окрашиваются фуксином в красный цвет, нервные клетки гематоксилином — в синий.

Для гистологического исследования берут кусочки аммонова рога и мозжечка, фиксируют их в 10%-ном формалине, ацетоне или жидкости Адуцкевича следующего состава: 80%-ной уксусной кислоты — 1 часть, хлороформа —2 части, 96° этилового спирта — б частей.

Продолжительность фиксации при комнатной температуре в формалине 1 сут, в ацетоне и жидкости Адуцкевича — 3—6 ч. После фиксации вырезают кусочки толщиной не более 1 —1,5 мм, заливают в парафин, после чего готовят гистологические срезы, высушивают и окрашивают.

Окраску по Туревичу производят следующим образом.

1. Срезы перед окраской депарафинируют в ксилоле 10—20 мин.

2. Смывают спиртом.

3. Окрашивают ядра клеток гематоксилином Вей-герта в течение 2 мин.

4. Срезы промывают водой.

5. Дополнительно окрашивают 1 % — ным раствором

Кислого фуксина в течение 1 мин.

6. Промывают водой.

7. Дифференцируют в смеси 95° спирта и насыщенного водного раствора пикриновой кислоты в течение 10—20 с до ясно-желтого оттенка.

8. Высушивают фильтровальной бумагой.

9. Обезвоживают абсолютным спиртом.

10. Просветляют в ксилоле в течение 1 мин.

11. Заключают в канадский, или пихтовый, бальзам.

Рис. 137. Общий вид замораживающего микротома:

/ — шланг для подачи углекислоты;

2—- столик; 3 — нож.

Знай об организме
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!: